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01

Gruppo
di Studio

Esperimentatori : R.Mené,M.Kim,A.Tenenbaum,M.Tiziani

N= 29 Ratti Wistar
Peso medio : 421g

Origine degli animali : Biotério Central of Campus of Ribeirão Preto of São Paulo University
Mantenimento : Experimental Pathology Lab of Pathology Department on Medicine School of Ribeirão Preto – USP
Custodia degli animali  : scatole di polipropilene
Cibo per Animali : dieta basica con acqua del laboratorio
Condizioni dell`illuminazione : luce naturale/cicli di buio sotto condizioni basiche controllate. 
Experimentators : A.Tenenbaum,M.Tiziani,R.Mené,Kim

pathology department

02

Utilizzo degli Animali & Campioni Istologici

Microscopia Convenzionale

I topi eranno sotto eutanasia in camere a CO2.

  • Incisione della cute con lama nº 23
  • Esplorazione ed Isolazione del muscolo pretibiale usando forbici di Metzenbaum.
  • Sezione dei tendini con forbici di Mayo .
  • Fissazione di Porzioni dei muscoli su matrice di sughero di quercia.
  • Incorporazione usando 50% di soluzione al formaldeide - 10% tamponato e 50% di paraffina pura per lo studio sotto microscopio ottico convenzionale. 
  • Colorazione delle matrici come processo istologico di routine.
  • Microtomo usato : Leika RM 2155
  • Colorazione dei campioni di muscolo con: ematoxillina-eosina, tricromo di Masson e picro-sirius rosso
  • Esaminazione Istologica era realizzata con microscopio convenzionale (Olympus BH2).
  • Osservazione sotto luce polarizzata
  • La documentazione fotografica era realizzata con microscopio Leika DMR collegato alla camera digitale Leika CD 300F e compatibile con PC.
 
microtome

03

Materiale

6 ratti/scatola
  • Gli Animali furono divisi in 6 scatole, come seguente :
    - 5 ratti per scatola, dalla Nr 1 alla  Nr 5.
    - 4 ratti nella scatola Nr 6 
  • Tutti gli animali erano sottoposti ad una valutazione della camminata con impronte dei piedi su carta speciale ,e previa immersione delle zampe posteriori in una soluzione di sapone

  • La Scatola Nr 1 aveva il gruppo di controllo, dove questi ratti avevano ricevuto l`applicazione di 0,1 ml di soluzione salina ( NaCl 0,9%) iniettata nel muscolo pretibiale destro. 
  • I ratti delle scatole da 2 a 5, hanno ricevuto 0,1 ml del Prodotto Originale Endopeel nello stesso muscolo come nel gruppo di controllo. 

  • La scatola Nr 6 era constituita di 4 ratti, e ciascuno aveva ricevuto 0,5 ml del Prodotto Originale Endopeel, questa volta iniettato nello strato subcutaneo.  

  • Tutti i ratti erano sottoposti alla valutazione della camminata prima e dopo le rispettive iniezioni.

boxes for rats

04

Metodi

Gli Animali erano studiati dopo
10 giorni- 1 mese- 3 mese -7 mese
sacrifice table

05

Controllo

Dopo iniezione di NaCl 0.5%

Commento : Niente da dichiarare dopo iniezione di soluzione fisiologica salina.

without treatment

Sx:Pretibiale-Non trattato

Dx:Pretibiale-Dopo 0.1 ml NaCl 0.9% IM

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10 giorni dopo iniezione di Endopeel

Scatola Nr 2
  • 10 giorni dopo iniezione 0.1ml  di Endopeel nel muscolo pretibiale destro (Dx).
  • Si osserva formazioni di vacuole , le quali circondate da linfociti.
  • Le quali Vacuole sono differenti dal tessuto necrotico.
  • La presenza di linfociti é correlata alla permeabilità delle membrane cellulari.

 

left control- 100xD10

Sx : Controllo-100x-Giorno10

right 100xD10

Dx:100x-Giorno10

right200xx

Dx :200x-Giorno10

right400xxD10

Dx :400x - Giorno10

07

1 mese dopo Iniezione Endopeel

Scatola Nr 3

1 mese dopo Iniezione 0.1ml di Endopeel nel muscolo pretibiale destro ( Dx) .
Che cosa viene visualizzato in nero nella figura Sx : 100x-Giorno30  non é una necrosi come potrebbe immaginare un dilettante.
In effetti, 4 conclusioni devono essere prese in considerazione

  • un artefatto di colorazione
  • un`assenza di necrosi
  • un`apoptosi
  • un processo biorigenerativo
left control- 100xD30

Sx : Controllo-100x-Giorno30

right 100x

Dx:100x-Giorno30

right400xxD30

Dx :400x-Giorno30

08

3 mesi dopo Iniezione di Endopeel

Scatola Nr 4

3 mesi (Giorno90) dopo iniezione 0.1ml di Endopeel nel muscolo pretibiale destro ( Dx)

left control- 100xD90

Sx : Controllo-100x-Giorno90

right 100x

Dx:100x-Giorno90

09

7 mesi dopo Iniezione di Endopeel

Scatola Nr 5

7 mesi (Giorno210) dopo iniezione IM di 0.1ml  di Endopeel nel muscolo pretibiale destro ( Dx).
Restitutio ad integrum completo dopo 7 mesi

left control- 100xD210

Sx : Controllo-100x-Giorno210

right 100x

Dx:100x-Giorno210

L Control 50xD210

Sx :Controllo 50x-Giorno210

R50X-D210

Dx:50X-Giorno210


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Iniezione Endopeel nel tessuto subcutaneo SC

Scatola 6

0.5 ml ( 5x 0.1ml):  Iniezione SC di Endopeel nel tessuto pretibiale subcutaneo SC destro (Dx).  

Sx:200x-Controllo-SC

R-D10-SC-200X

Dx-Giorno10-SC-200X

R-D30-SC-200X

Dx-Giorno30-SC-200X

R-D90-SC-200X

Dx-Giorno90-SC-200X

R-D210-SC-200X

Dx-Giorno210-SC-200X

R-D210-SC-400X

Dx-Giorno210-SC-400X

conclusions
  • Endopeel induce una miofibrolisi selettiva reversibile e una risposta infiammatoria approssimativamente nel periodo di 1 mese.
  • I cambiamenti dei tessuti muscolari sono quasi completamente reversibili.
  • Il muscolo é il posto migliore per iniettare Endopeel ,per la sua maggiore efficacità, il controllo e la durata della sua azione.
  • Nessuna necrosi ne ascesso sono stati osservati durante la sperimentazione.

Other Study applied to Gynecology

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